AK Gauglitz - Optische Spektroskopie

Epitopmapping

Die genaue Bestimmung der Erkennungsstelle eines Antikörpers auf der Oberfläche des Proteins, das Epitop, ist die Vorstufe für die diagnostische Anwendung des Antikörpers oder des Peptids.

Das Epitop eines murinen Antikörpers, der gegen die humane Transglutaminase gerichtet ist, konnte parallel über RIfS bestimmt werden. Es wurden 21 Peptide, mit einer Länge von 15 Aminosäuren, synthetisiert, die das Proteinsegment 441 bis 475 der Transglutaminase abdeckten. Mit einem Bindungshemmtest wurde die Abschwächung der Bindung des Antikörpers zur funktionalisierten Oberfläche durch das jeweilige Peptid beobachtet. In einem parallelen Ansatz konnte die Abschwächung des Signals aller 21 Peptide gleichzeitig in einer Dreifach-Bestimmung ermittelt werden. Von den 3 Peptiden, die die größte Inhibition zeigten und damit die höchste Affinität zum Antikörper besitzen, konnten die Affinitätskonstanten bestimmt werden.