Eberhard-Karls-Universität Tübingen
Universitätsklinikum
IMIT - Interfakultäres Institut für Mikrobiologie und Infektionsmedizin
Elfriede-Aulhorn-Str. 6
72076 Tübingen
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Antonia Beuttner Tel: 29-81536; antonia.beuttner@med.uni-tuebingen.de
Karolin Leibiger Tel: 29-81526; karolin.leibiger@med.uni-tuebingen.de
Summary
By means of E. coli mutants and Y2H assays we will elucidate which periplasmic chaperones are involved in biogenesis of, and directly interact with, YadA and invasin. To understand the molecular mechanism of YadA and invasin biogenesis, essential BAM complex components BamA and BamD, including the pore activity of the BamA-barrel, will be studied in detail. We will analyse whether and how BamD directly interacts with BAM complex substrates (site directed mutagenesis, rescue assays with BamA/BamD depletion strains, Biacore). Moreover, we will address the correlation of YadA trimer stability, YadA OM insertion, turnover kinetics (Pulse-Chase-Labeling) and Ye virulence particularly with a focus on evasion of the host complement system (complement binding, mouse infection model).
Zusammenfassung
Mit Hilfe von E. coli-Mutanten und Y2H Assays werden wir herausfinden, welche Chaperone an der Biogenese von YadA und Invasin beteiligt sind und welche direkt damit interagieren. Um den molekularen Mechnismus der YadA- und Invasin-Biogenese zu verstehen, werden wir die essentiellen BAM-Komplex-Komponenten BamA und BamD, u.a. die Rolle der Porenaktivität des BamA-barrels, genauer untersuchen. Wir werden analysieren, ob und wie BamD mit Substraten des BAM-Komplex interagiert (gerichtete Mutagenese, Rescue-Versuche mit Depletionsstämmen, Biacore). Zusätzlich werden wir den Zusammenhang zwischen YadA-Trimerstabilität, -Insertions- und -Turnover-Kinetik (Pulse-Chase-Labeling) und Ye-Virulenz mit Fokus auf die Evasion des Komplementsystems untersuchen (Komplementbindung, Maus-Infektionsmodell).